ABSTRACT The objective of this work was to identify and describe the morphological aspects of the pyrene and the different stages of developing embryos of Ilex paraguariensis. The pyrenes were collected in the year 2016 and 2017, of ripe fruits. The pyrenes, a total of 400 per site and year of collection, remained for 24 h immersed in water for the section and internal observation. The pyrenes, with the visualized embryo, were used for the anatomical description and fixed for the histological evaluation. They were fixed in paraformaldehyde solution and included in Leica™ historesin. The samples were sectioned in Leica microtome with a thickness of 7 μm, and the sections were stained with Toluidine Blue. The pyrenes are formed by endocarp, integument, endosperm, and embryo. The embryos were classified in the globular, heart (occupying approximately 10% of the length of the seed), post heart (15% of length), torpedo (20% of length), and mature (40% of length) stages; and were located below the micropyle, aligned to the external point. The region surrounding the embryo, called the cavity, consists of a lignified layer.

Resumo Pirênios de Ilex parguariensis, popularmente conhecida como erva-mate, foram classificados como dormentes. O objetivo deste estudo foi investigar as causas da dormência dos pirênios de Ilex paraguariensis. Para isso, foram realizados os seguintes testes: a) Dormência física: taxa de absorção em água e em azul de metileno; detecção de lignina e compostos lipofílicos no endocarpo e tegumento; b) Dormência fisiológica: bioensaios em sementes de alface, detecção e quantificação de compostos fenólicos; c) Dormência morfológica: análise embrionária. Para a taxa de absorção, observou-se um aumento na massa dos pirênios, porém, quando a embebição foi realizada em azul de metileno, a absorção ocorreu apenas no endocarpo. A lignina também foi observada na forma de uma camada de esclerênquima próxima ao tegumento da semente. Semelhantemente compostos lipofílicos foram observados em uma camada externa ao endosperma. Os bioensaios com sementes de alface indicaram a presença de inibidores químicos. Na avaliação morfológica dos pirênios, apenas 55,5% dos embriões foram visualizados e estavam nos estágios globular ou coração. Pirênios de Ilex paraguariensis possuem dormência combinada: física (não há absorção de água), morfológica (devido ao subdesenvolvimento do embrião) e há evidências de dormência fisiológica (presença de inibidores); Contudo, recomenda-se investigar os agentes inibidores.

Abstract Ilex parguariensis pyrenes, popularly known as “yerba mate”, were classified as dormant. This study aim to investigated the causes of dormancy in Ilex paraguariensis’ pyrenes. Hence, the following tests were performed: a) Physical dormancy: rate of absorption in water and methylene blue; detection of lignin and lipophilic compounds in the endocarp and integument; b) Physiological dormancy: bioassays in lettuce seeds, detection, and quantification of phenolic compounds; c) Morphological dormancy: embryo analysis. For the absorption rate, an increase was observed in the mass of the pyrenes, however, when imbibition was performed in methylene blue, absorption only occurred in the endocarp. Lignin was also observed in the form of a sclerenchyma layer next to the seed coat. Similarly, lipophilic compounds were observed in a layer, external to the endosperm. The bioassays with lettuce seeds indicated the presence of chemical inhibitors. In the morphological evaluation of the pyrenes, only 55.5% of the embryos were visualized and they were in the globular or heart stages. Ilex paraguariensis pyrenes have combined dormancy: physical (not water absorption), morphological (due to the underdeveloped embryo), and there are shreds of evidence about physiological dormancy (presence of inhibitors); however, it is recommended to investigate the inhibitory agent.

Resumo A estratificação das sementes de Ilex paraguariensis A. St.-Hill. (erva-mate) em areia úmida por períodos de quatro a seis meses é uma prática comum em viveiros, utilizada para a superação de dormência das mesmas. Entretanto, este processo pode apresentar difícil controle fitossanitário, devido ao elevado grau de umidade e a grande concentração de sementes no mesmo local. Assim, objetivou-se verificar a influência da estratificação em areia autoclavada na qualidade sanitária de sementes de erva-mate. Sementes de quatro lotes foram submetidas à estratificação em areia úmida autoclavada, durante três e seis meses, tendo sua sanidade avaliada em meio BDA ao final destes períodos, assim como em sementes que não passaram por estratificação. Ao final do período de estratificação, as sementes apresentaram aspecto superficial escurecido, o que pode estar ligado à ação dos fungos na degradação do endocarpo. Foram identificados: Fusarium graminearum, Fusarium oxysporum, Fusarium guttiforme, Paecilomyces sp., Aspergillus sp., Penicillium sp. Já Aureobasidium melanogenum, Trichoderma sp., Curvularia sp., Rhizopus sp., Alternaria sp., Cladosporium sp. e Bipolaris sp. tiveram menores ocorrências. Observou-se a redução de Fusarium graminearum, Fusarium oxysporum, Fusarium guttiforme, Aspergillus sp. e Penicillium sp. após a estratificação em areia autoclavada e o gênero Paecilomyces somente foi observado aos 180 dias de estratificação, podendo estar relacionado com a degradação do endocarpo de sementes de Ilex paraguariensis.

Abstract The stratification of Ilex paraguariensis seeds (yerba mate) in wet sand for periods of four to six months is a common practice in nurseries, used to overcome their dormancy. However, this process may present difficult phytosanitary control due to the high moisture content and the high concentration of seeds in the same place. Thus, the present work had the objective of verifying the influence of the stratification in autoclaved sand on the sanitary quality of yerba mate seeds from different lots. Seeds of four lots were submitted to wet stratification for three and six months, and their sanity was evaluated at the end of these periods, as well as seeds that did not undergo stratification. At the end of the stratification period, the seeds had a darkened surface appearance, which may be related to the action of the fungi in the degradation of the endocarp. These ones were identified: Fusarium graminearum, Fusarium oxysporum, Fusarium guttiforme, Paecilomyces sp., Aspergillus sp., Penicillium sp. Already Aureobasidium melanogenum, Trichoderma sp., Curvularia sp., Rhizopus sp., Alternaria sp., Cladosporium sp. and Bipolaris sp. had fewer occurrences. Observed reduction of Fusarium graminearum, Fusarium oxysporum, Fusarium guttiforme, Aspergillus sp. and Penicillium sp. after stratification and the genera Paecilomyces was only observed at 180 days of stratification, and may be related to the degradation of the endocarp of Ilex paraguariensis seeds.